玉米赤霉烯酮检测试剂盒 使用说明书 （酶联免疫法） 1 原理及用途 本试剂盒采用间接竞争 ELISA 方法检测谷物、饲料、食用 油、啤酒、酱油等样本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN） （又称 F-2 毒素），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根 酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入 标准品或样本溶液，样本中的玉米赤霉烯酮和酶标板上预包被 偶联抗原竞争抗玉米赤霉烯酮抗体，加入酶标记物后，用 TMB 底物显色，样本吸光度值与其所含玉米赤霉烯酮含量成负相 关，与标准曲线比较即可得出样本中玉米赤霉烯酮的残留量。 2 技术指标 2.1 试剂盒灵敏度：0.3ppb(ng/ml) 2.2 反应模式：25℃，30min～15min 2.3 检测下限： 谷物及其食品原料…………………6ppb 饲料及饲料原料………………………18ppb 玉米皮、麦麸…………………………18ppb 2.4 交叉反应率： 玉米赤霉烯酮……………………100% 玉米赤霉酮………………………13% 玉米赤霉醇………………………＜1% 2.5 样本回收率： 谷物及其食品原料…………………90%±15% 饲料及饲料原料………………………80%±15% 玉米皮、麦麸…………………………80%±15% 3 试剂盒组成 酶标板……………………………96 孔 标准液（黑盖）：各 1ml 0ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb、24.3ppb 酶标记物（红盖）…………………5.5ml 抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml 底物液 A（白盖）…………………6ml 底物液 B（黑盖）……………………6ml 终止液（黄盖）………………………6ml 20×浓缩洗涤液（白盖）……………40ml 说明书…………………………………1 份 盖板膜…………………………………1 张 自封袋…………………………………1 个 4 需要的器材和试剂 4.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、振荡器、离心机、刻 度移液管、天平（感量 0.01g） 4.2 微量移液器：单道 20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl 4.3 试剂：甲醇、去离子水 5 样本前处理 5.1 样本处理前须知： 实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实 验结果。 5.2 配液： 配液 1：样本提取液 90%甲醇，即 V 甲醇:V 去离子水=9：1。 配液 2：工作洗涤液 将浓缩洗涤液 20 倍稀释(1 份洗涤液加 19 份去离子水)。 5.3 样本前处理步骤： 5.3.1 谷物（大米、玉米、小米等低脂含量）及其食品原料 1）称取 2g 粉碎样品于 50ml 离心管中，加 8ml 样本提取液， 振荡 5 分钟，室温 4000 转/分离心 10 分钟； 2）取 0.5ml 上清，加入 2ml 去离子水，混匀； 3）取 50μl 进行分析。 稀释倍数：20 检测下限：6ppb 5.3.2 饲料及饲料原料 1）称取 2g 粉碎样品于 50ml 离心管中，加 8ml 样本提取液， 振荡 5 分钟，室温 4000 转/分离心 10 分钟； 2）取 0.5ml 上清，加入 1ml 提取液，震荡混匀； 3）取 0.5ml 混匀液体，加入 2ml 去离子水，混匀； 4）取 50μl 进行分析。 稀释倍数：60 检测下限：18ppb 5.3.3 玉米皮、麦麸等吸水性强的样本 1）称取 2g 粉碎样品于 50ml 离心管中，加 24ml 样本提取液， 振荡 5 分钟，室温 4000 转/分离心 10 分钟； 2）取 0.5ml 上清，加入 2ml 去离子水，混匀； 3）取 50μl 进行分析。 样本稀释倍数：60 检测下限：18ppb 注：由于毒素在样本中的分布呈非均匀状态，取样时需多点取 样充分混匀后再取 2g 进行试验。 6 酶联免疫试验步骤 将所需试剂从 4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡 30min 以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解， 每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框 架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。 6.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本 和标准品做 2 孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。 6.2 加样反应：加标准品或样本 50µl/孔到各自的微孔中，然 后加酶标记物 50µl/孔，再加入 50µl/孔的抗体工作液，用盖 板膜封板，轻轻振荡 5 秒混匀，25℃反应 30 分钟。 6.3 洗 涤：小心揭开盖板膜，甩去孔内液体，每孔加 350ul 工作洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，最后一次拍 干（用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺 破）。 6.4 显 色：每孔加入底物液 A 50µl，再加底物液 B 50µl， 轻轻振荡 5 秒混匀，25℃避光显色 15 分钟（若蓝色过浅，可 适当延长反应时间）。产品缩写：ZEN 货号：RJ-P100055 版本：2022.1 2 6.5 终 止：每孔加入终止液 50µl，轻轻振荡混匀，终止反 应。6.6 测吸光值：用酶标仪于 450nm 处测定每孔吸光度值（建议 用双波长 450/630nm）。测定应在终止反应后 10 分钟内完成。 7 结果分析 7.1 百分吸光率的计算 标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸 光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度 值，再乘以 100%，即 百分吸光度值（%）＝ A ×100% A0 A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 A0—0ppb 标准溶液的平均吸光度值 7.2 标准曲线的绘制与计算 以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb） 的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分 吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓 度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的 准确、快速分析。（欢迎来电索取） 8 注意事项 8.1 室温低于 25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致 所有标准的 OD 值偏低。 8.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲 线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行 下一步操作。 8.3 混合要均匀，洗板要，在 ELISA 分析中的再现性，很 大程度上取决于洗板的一致性。 8.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。 8.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试 剂盒中的试剂。 8.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0 标准的吸光 度值小于 0.5 个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。 8.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。 9 贮藏及保存期 储藏条件：试剂盒于 2-8℃保存，避免冷冻。 保 质 期：该产品有效期为 1 年，生产日期见包装盒。